細(xì)菌與菌落的形態(tài)觀察
一、菌落形態(tài)觀察
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>
通過在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物，觀察菌落的形態(tài)特征，以便初步鑒定菌種。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 從純化的平板（單個(gè)菌落）取樣或做稀釋涂布培養(yǎng)，按無(wú)菌操作。
2. 在合適溫度與時(shí)間培養(yǎng)（例如大腸桿菌37°C，12–24h；土壤菌可能需更久）。
3. 取出培養(yǎng)皿，先不打開蓋子，用放大鏡或肉眼觀察并記錄以下特征。
形狀：圓形、橢圓形、不規(guī)則、絲狀、根狀等。
邊緣：整齊、波狀、分枝狀、鋸齒狀。
表面：光滑、粗糙、皺褶、有光澤或無(wú)光澤。
隆起：平坦、凸起、傘狀、凹陷。
透明度：透明、半透明、不透明。
顏色：白、黃、紅、綠等。
氣味：特征性氣味。例如綠膿桿菌有甜腥味。僅作補(bǔ)充證據(jù)，操作時(shí)注意安全通風(fēng)。
小技巧：觀察時(shí)可以將培養(yǎng)皿置于黑色背景上，有助于分辨菌落邊緣和顏色差異。
二、顯微鏡下的細(xì)菌形態(tài)觀察
實(shí)驗(yàn)步驟：
01制作細(xì)菌涂片
①在載玻片上滴一小滴蒸餾水（固體樣品先與水混勻）。
②用接種環(huán)取少量菌體在水滴中涂勻至形成薄膜。
③晾干（自然或電熱片低溫），用甲醇或酒精短暫固定（30~60s）并晾干。
02染色
如革蘭染色、芽孢染色等。
03顯微鏡下觀察
觀察指標(biāo)：
形態(tài)：球菌、桿菌、螺旋菌等。
排列：?jiǎn)蝹€(gè)、成對(duì)（雙球菌）、鏈狀（鏈球菌）、簇狀（葡萄球菌）等。
大小：一般0.5–5μm左右。
運(yùn)動(dòng)性：有無(wú)鞭毛（可用鞭毛染色或懸滴法觀察）
三、常見染色方法及目的
（一）革蘭染色（Gram stain）
用途：區(qū)分革蘭陽(yáng)性（紫色）與革蘭陰性（紅色）
步驟：
1.結(jié)晶紫染色 1min → 水洗。
2.加碘液 1min → 水洗（碘是媒染劑）。
3.退色：酒精/丙酮短促?zèng)_脫（5–10s） → 立即水洗。
4. 復(fù)紅：沙黃或番紅染色 30–60s → 水洗，晾干，油鏡觀察。
（二） 芽孢染色
用途：觀察芽孢（耐熱、耐化學(xué)） 步驟：
用馬拉綠或孔雀綠在加熱條件下染芽孢，然后復(fù)紅染細(xì)胞。芽孢呈綠色、細(xì)胞呈紅色。
大腸桿菌，圓形、光滑、濕潤(rùn)、灰白色，革蘭陰性桿菌（紅色）。
金黃色葡萄球菌，圓形、隆起、光亮、金黃色，革蘭陽(yáng)性球菌（紫色）。
枯草芽孢桿菌，粗糙、不規(guī)則、干燥，陽(yáng)性桿菌、有芽孢。
銅綠假單胞菌，擴(kuò)散性強(qiáng)，綠色熒光，帶甜腥味，陰性桿菌。
鏈霉菌，干燥、粉末狀、土味明顯，陽(yáng)性絲狀菌。
五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1. 嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止混入其他菌。
2. 觀察前不要打開培養(yǎng)皿蓋子太久，以免污染或感染。
3. 使用油鏡觀察時(shí)，一定要加香柏油并在使用后及時(shí)擦干。
4. 不同菌落之間要做好標(biāo)記與記錄（編號(hào)、日期、培養(yǎng)條件）。
5. 染色實(shí)驗(yàn)中，洗脫酒精的時(shí)間控制非常關(guān)鍵，過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致脫色。
6. 多種不同菌落同時(shí)出現(xiàn)：說明接種或培養(yǎng)時(shí)污染或樣品本身含混合菌。
7. 顏色隨時(shí)間變化：色素產(chǎn)量與培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基有關(guān)；記錄培養(yǎng)時(shí)間。
8. “假陽(yáng)性/假陰性”染色：退色過久、過短或固定不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致假讀數(shù)；設(shè)對(duì)照。
9. 干擾物（瓊脂碎片、沉淀）：拍照和觀察時(shí)注意不要把雜質(zhì)誤認(rèn)為菌落特征。
總結(jié)：
菌落與形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)茏屛覀儚摹翱淳洹钡健翱醇?xì)胞”，再到“看特征結(jié)構(gòu)”，這三層結(jié)合起來(lái)，是細(xì)菌初步鑒定的基礎(chǔ)。簡(jiǎn)單來(lái)說就是“宏觀看菌落，微觀看細(xì)胞，染色辨結(jié)構(gòu)。”
