薄層色譜實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
關(guān)于配制CMC-Na：
1. 先將稱好的CMC加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,在加熱煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過(guò)程中不易形成顆粒,煮沸時(shí)間短.
2. CMC溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實(shí)際操作中0.4%～0.5%最為實(shí)用，濃度高了將來(lái)顯色時(shí)如果有加熱過(guò)程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低了鋪出來(lái)的板子不結(jié)實(shí)，輕輕一碰就掉渣，不好保存，而且點(diǎn)樣時(shí)會(huì)很緊張，容易出洞.
3. 0.5%CMC-Na與水浴溶漲至充分?jǐn)嚢枞軡q，如果不好溶漲，可在溶脹前加幾滴乙醇，比較好溶，但是盡量不加，因?yàn)榧尤胍掖己笫笴MC-Na的粘合性降低。充分溶脹后，用脫脂棉墊到布氏漏斗上抽濾。封口冷藏待用。
4. (1)CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兌，否則，幾天以后就會(huì)變綠，起霉。注意放置時(shí)間太長(zhǎng)的CMC-Na溶液可能會(huì)發(fā)黃，而且可能有霉菌出現(xiàn)，絕對(duì)不能再使用。
(2)如果有抽濾裝置你可以直接把CMC-Na溶液濾過(guò)，就可以不必等它沉淀再取上清液了，還有兩個(gè)好處一是節(jié)省CMC-Na溶液，二是倒濾過(guò)的CMC-Na溶液的時(shí)候不必?fù)?dān)心會(huì)把下層的不溶物倒出來(lái)了!)有個(gè)辦法過(guò)濾CMC溶液，在布氏漏斗上平鋪薄薄一層脫脂棉，千萬(wàn)保證每個(gè)小孔都沒(méi)漏掉哦!用蒸餾水潤(rùn)濕脫脂棉，啟動(dòng)真空泵，抽緊后就可以放心大膽的倒CMC溶液了，保證濾過(guò)的溶液澄清透明，而且長(zhǎng)時(shí)間放置不沉淀。
5. CMC-Na是一種高分子 材料,而高分子材料的溶解必然都會(huì)有一個(gè)溶脹,溶解的過(guò)程,所以配制的時(shí)候,應(yīng)該將稱好的CMC-Na少量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開(kāi)平鋪,這樣能夠充分浸潤(rùn),使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解,當(dāng)然如果你不是很急著用的話也完全可以,直接用水泡著放那,估計(jì)十天半月的也可以用了.
6. .CMC-Na的配制，大家也說(shuō)了很多，我只是想說(shuō)一下在CMC-Na的溶解過(guò)程中，可以使用可進(jìn)行加熱操作的磁力攪拌器，大概攪拌5小時(shí)，應(yīng)該可得到滿意的效果。而且這樣就可以使CMC-Na溶解，并且溶液更澄清。
CMC-Na后處理，很多人說(shuō)是過(guò)濾，或者抽濾，我覺(jué)得可能速度很慢，而且又容易浪費(fèi)。我的做法是離心，5000rpm離心20min。倒出上清液，(非常清，也同時(shí)消除了過(guò)濾過(guò)程中可能發(fā)生的污染。)更難能可貴的是，我可以收集下面沒(méi)有充分溶解的CMC-Na。繼續(xù)加到水中，還可以配制!!何樂(lè)而不為呢?
7. 鋪CMC-Na的薄層板,先將CMC-Na溶解完全,可將溶解成所需濃度加熱后超聲處理,再抽濾,可很快得到上清液
關(guān)于薄層板的要求：
1.載板要求平滑清潔，沒(méi)有劃痕，在使用前可用洗滌液或肥皂水洗滌，再用水沖洗干凈，干。
2. 怎么樣的玻璃算是干凈：就是用洗潔精浸泡也好，用酸浸泡也好，當(dāng)你覺(jué)得洗干凈的時(shí)候，拿在手上立起來(lái)，如果發(fā)現(xiàn)水不是呈股流下，而是呈瀑布狀態(tài)流下，那么說(shuō)明你的玻璃已經(jīng)洗干凈了。其實(shí)真正洗干凈的玻璃，很快就可以晾干的。
3.怎樣清洗用過(guò)后的薄層板，我試著用了洗衣粉、洗潔凈，反復(fù)洗了數(shù)遍，仍然掛水珠。鋪制薄層板要求玻璃板干凈、整潔、不掛水珠的。建議用洗液泡。如果還解決不了那就只好放棄這塊玻璃板了，有說(shuō)可以用鹽酸的。
關(guān)于研磨及鋪板要求：
1. 取薄層層析 硅膠重量與CMC-Na的體積比為1：4的比例(該比例能使硅膠板鋪出的效果較好不至于掉渣也不至于板太硬)充分混合碾磨，至拿起碾錘能看到混合液與碾錘有一定的粘連。即好。薄層板一定要光滑無(wú)油污，取一定量的溶液置板上，用薄棒引導(dǎo)使其鋪滿板面，一手托起硅膠板另一手在下輕輕敲，轉(zhuǎn)動(dòng)板子均勻的敲勻。
2. 硅膠的研磨，當(dāng)然是一個(gè)方向了，可以適量的加入一定量的無(wú)水乙醇或丙酮來(lái)消泡，也可以適當(dāng)攪拌后放在干凈容器內(nèi)超聲，效果都是不錯(cuò)的。手工鋪硅膠的用量一般10*20的約3～4克， 硅膠和CMC-Na的用量一般是1：2.8～3，具體根據(jù)要鋪板子的厚度和CMC-Na的濃度決定。
3.依據(jù)薄層板使用需要，將適量研好的吸附劑倒到薄層板上，先用小錘將吸附劑蕩勻，傾斜層析板，使吸附劑流至層析板一側(cè)，待吸附劑蓄積一定量后，再反向傾斜層析板，使吸附劑回流;然后是另外兩個(gè)方向，重復(fù)上述操作，后輕顛幾下薄層板即可。
4. 將載玻片置于平臺(tái)上，用藥匙舀取糊狀硅膠，均勻地鋪在載玻片表面。鋪板時(shí)，可以順著板中間倒，也可以順著某個(gè)邊緣倒，也可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上，倒時(shí)也要注意不要引入小氣泡。
如有需要，可以雙手10個(gè)指頭托住玻璃板，有節(jié)奏的顛簸，使得糊狀硅膠分布勻稱。尤其是載板的四個(gè)角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。顛好的板，表面看上去要光滑平整，沒(méi)有氣孔。薄層板鋪好后一定要放置在平的臺(tái)面上，否則難保證板面硅膠的厚度均勻。
5. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后,即看不出有明顯的水印,放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開(kāi)鼓風(fēng)干燥30分鐘,再升溫干燥至干,注意升溫過(guò)快在使用的過(guò)程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象不利于分離,以上方法經(jīng)本人兩年多的實(shí)踐效果較好且耗時(shí)又不太長(zhǎng)。
6. 10g吸附劑加入3滴95%乙醇以驅(qū)趕氣泡;
關(guān)于展開(kāi)劑：
1. 分離的樣品酸性比較大，一般在展開(kāi)劑中加酸
2. 加甲酸是因?yàn)樵摌悠肥撬嵝缘模铀岬牧亢驮撐镔|(zhì)的酸性成正比關(guān)系，加水可能是因?yàn)槟愕臉悠肥擒疹惖挠盟崴鲆幌戮彌_，目的就是讓斑點(diǎn)圓滑，不脫尾，展距良好。
3. 飽和也非常重要，邊緣效應(yīng)很嚴(yán)重的不妨用下端浸在展開(kāi)劑中的濾紙貼在展開(kāi)缸的內(nèi)壁，這樣飽和效果會(huì)好一些
4. 1)在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性;
2)以展開(kāi)劑邊緣效應(yīng)的大小，確定展開(kāi)劑平衡時(shí)間的長(zhǎng)短，一般平衡時(shí)間在30分鐘即可。
5. 有機(jī)溶劑的極性，甲醇>氯仿，因此在氯仿：甲醇：氨水 (10:1:0.6)這個(gè)展開(kāi)劑中，如果極性略大，可適當(dāng)降低甲醇比例;如極性太小，可適當(dāng)增大甲醇比例。
氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2 極性肯定是相同的，這有問(wèn)題嗎?
另外還有一個(gè)問(wèn)題，這個(gè)展開(kāi)劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開(kāi)劑的平衡和層析缸的密封。
6. 不同的展開(kāi)系統(tǒng)意思是其中至少應(yīng)該有一種溶劑不同(最好是不同分類組的溶劑)，而不是比例不同。或者使用不同的固定相。
關(guān)于展開(kāi)：
1. TLC 中樣品拖尾現(xiàn)象是什么原因?該如何解決?
2.TLC中樣品跑成幾乎為一條線,斑點(diǎn)沒(méi)有清晰的分離,想請(qǐng)教一下這是什么原因造成的?一般情況下該如何解決?
造成問(wèn)題1的原因基本相同：
a、對(duì)于一些具有酸堿性的化學(xué)成分，在溶液中部分電離，事實(shí)上展開(kāi)時(shí)存在分子、離子兩種狀態(tài)，以中性的有機(jī)試劑展開(kāi)必然會(huì)出現(xiàn)兩種層析行為，造成脫尾甚至是一條線。
b、展開(kāi)劑選擇不當(dāng)
c、點(diǎn)樣量過(guò)大，樣品超載
解決辦法：
a、在展開(kāi)劑中加幾滴甲酸或冰醋酸;
b、展開(kāi)時(shí)以氨水飽和
c、減少點(diǎn)樣量
d、參考文獻(xiàn)，調(diào)整展開(kāi)劑種類、比例
2. 我想問(wèn)問(wèn)，關(guān)于TLC二次展開(kāi)，是在第一次展開(kāi)顯色后再在繼續(xù)第二次展開(kāi)，還是在第一次展開(kāi)后，換另一種展開(kāi)劑接著展開(kāi)啊??
請(qǐng)哪位大俠指點(diǎn)一下關(guān)于TLC的二次展開(kāi)。二次展開(kāi)是依據(jù)樣品定的，但肯定要在第一次展開(kāi)后，將板晾干或吹干，再放入另一種展開(kāi)劑中展開(kāi)，有的樣品二次展開(kāi)還要換展開(kāi)方向，和原方向垂直。所以要以實(shí)際分離樣品需要而定。一般是因?yàn)闃悠烦煞侄啵瑯O性差別有的大，有的
關(guān)于顯色：
1. 在工作中研究過(guò)用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時(shí)，后改用不加CMC輔的水板來(lái)作，就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。
感覺(jué)輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達(dá)1：3.5左右，而且研磨后要盡快涂布，不能易于凝固而難于涂布，我是百思不得其解，難道CMC還有類似穩(wěn)定劑的作用
2. “0.5%的板加熱時(shí)間長(zhǎng)了就會(huì)黑”，是在層析完，顯色后吧，我也遇到過(guò)同樣的情況，這只有嚴(yán)格控制加熱顯色的時(shí)間。
這個(gè)問(wèn)題應(yīng)該是這樣回答：但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時(shí)，若改用不加CMC輔的水板來(lái)作，就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象，但不加CMC輔的板又太軟，點(diǎn)樣時(shí)容易點(diǎn)出洞，有個(gè)好辦法是將CMC的濃度調(diào)至0.1%，這樣就不易烘黑的。不信你試試，我們這邊藥檢所都這樣做的
3. 關(guān)于薄層板加熱變黑的問(wèn)題，其實(shí)很容易解決：當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了，可以用電吹風(fēng)在板子背面吹吹就能顯色了.我們實(shí)驗(yàn)室里一般都采用此法，簡(jiǎn)便、快潔.如果一非想使用烘箱烘的話，一定要用帶玻璃窗的，當(dāng)看到顯色了就取出，不然不好控制顯色時(shí)間，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，CMC容易碳化變黑
4.各位樓主真是經(jīng)驗(yàn)豐富，我鋪的0.5%的板加熱時(shí)間長(zhǎng)了就會(huì)黑，有什么好著嗎?
根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，薄層版變黑與CMC-Na的濃度過(guò)大有關(guān)，如果你留意的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時(shí)，加熱時(shí)間稍長(zhǎng)就會(huì)變黑(其他顯色劑是沒(méi)事的)，我老師說(shuō)這是因?yàn)闈饬蛩岚袰MC-Na炭化了，其實(shí)[color=blue=這種情況你只要適當(dāng)降低CMC-Na的濃度[/color]就可以了，當(dāng)然如果不加CMC-Na的話容易把板弄破。
一般我都是顯色后用電吹風(fēng)吹的，要均勻吹，電吹風(fēng)離板的距離要遠(yuǎn)些，防止部分會(huì)黑。
另還要注意顯色劑，如果顯色劑中含有硫酸，加熱時(shí)間一定要掌握好，不可太長(zhǎng)。
5.CP2000中277頁(yè)蘇氨酸的TLC的其它氨基酸檢查似乎有問(wèn)題: ...以"正丁醇丁酮濃氨溶液水"為展開(kāi)劑, 展開(kāi)后,晾干,噴以茚三酮的丙酮溶液(1-50),...
茚三酮與濃氨溶液起顯色反應(yīng), 弄得整塊板都有色,茚三酮氧化蘇氨酸后再與釋放出的氨氣起反應(yīng)生成的點(diǎn)在整塊板中尚能看到,其它氨基酸就別想看了.
氨基酸類的薄層鑒別過(guò)程中，顯色前先將展完的板子在烘箱內(nèi)烘一段時(shí)間，從而確保展開(kāi)劑揮干凈，效果不錯(cuò)
關(guān)于裂板：
1. 板子會(huì)裂口，一則可能是因?yàn)楣枘z的比例太大，二則可能是，板子要在常溫下晾干后，再在烘箱中活化。如果鋪完不久就在較高溫度下，裂口的幾率就比較高的。
2. “晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。”
你的板沒(méi)有完全干透，表面看是干了，但是最中間的沒(méi)有干，所以你直接放入105度的烘箱烘，當(dāng)然會(huì)炸裂了，所以應(yīng)該先用低溫大約40度左右烘30分鐘左右，再用105度活化，就可以解決這個(gè)問(wèn)題了。
3. 關(guān)于活化出現(xiàn)裂板、爆板的問(wèn)題。我從沒(méi)有遇上過(guò)。活化我是這樣處理不要等到溫度達(dá)到100度，而是設(shè)好溫度后就將板子放在干燥箱，然后再通電加熱，達(dá)到最高溫度后停留5分鐘左右即可。這樣水分是慢慢由內(nèi)而外散發(fā)，而不是由外向內(nèi)散發(fā)，避免了表面成膜，里面還在散發(fā)水氣，豈有不裂、不爆的道理!。
關(guān)于點(diǎn)樣：
1. 點(diǎn)樣我本人沒(méi)有什么技巧，導(dǎo)師教了我一招挺好用，寫出來(lái)大家分享，就是在點(diǎn)樣時(shí)食指放在點(diǎn)樣管的上端，當(dāng)點(diǎn)樣管的下端與硅膠板接觸的瞬間輕輕松動(dòng)上端的食指，溶液自然從點(diǎn)樣管出來(lái)，迅速提起點(diǎn)樣管，就這樣反復(fù)操作點(diǎn)出的斑點(diǎn)既小又均勻。但要提出樣品溶液不能太濃，濃度太大，點(diǎn)下的樣品不能被硅膠很好的吸收，不利于分離。
2. 關(guān)于點(diǎn)樣，我上學(xué)的時(shí)候，老師用比較便宜的進(jìn)樣器(大約10幾塊錢吧，10μl即可)，將針尖打磨圓滑，老師好像是用銼一點(diǎn)一點(diǎn)銼的，這樣點(diǎn)樣的時(shí)候樣品溶液不容易沿針尖上行(甲醇溶液都這樣)，并且針尖不會(huì)刺破已經(jīng)鋪好的薄層板。
現(xiàn)在，我和師兄都是實(shí)行的這個(gè)辦法，還是比較實(shí)用的，點(diǎn)樣量可以精確到0.5μl。當(dāng)然，點(diǎn)樣的時(shí)候手不能抖動(dòng)，動(dòng)作要輕，這些要領(lǐng)在于意會(huì)，逐漸鍛煉，相信你會(huì)體會(huì)到其中的快感。
3. 要磨平微量進(jìn)樣器的針尖，簡(jiǎn)單的方法就是，在展缸的蓋子上輕磨(當(dāng)然是靠近中間部分)，就很快能解決問(wèn)題 ，且很平滑。
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