PNA寡核苷酸處理方案
1.PNA具有絞高的親和力和特異性。
2.室含嘌呤的PNA低聚物的溶解度降低，并傾向于聚集，建議低聚物的嘌呤含量低于50%，在PNA夾中一個(gè)低聚物的嘌冷(特別是G堿段不超過(guò)6段)，因?yàn)樗苄苑浅Ｖ匾？梢蕴砑觾蓚€(gè)賴氨酸來(lái)提高長(zhǎng)PNA或具有高票呤的PNA的溶度。存儲(chǔ) 和 處理
1.PNA作為凍干粉(超過(guò)5年)或作為水中溶液(至少一年)儲(chǔ)存起來(lái)非常穩(wěn)定-20“或更低。對(duì)于長(zhǎng)期存儲(chǔ)，-70°2.當(dāng)準(zhǔn)備使用時(shí)，向下旋轉(zhuǎn)試管，將50n摩爾的PNA溶解在1 ml無(wú)瑩水中，制成50 uM的原液。渦旋和混合良好，以實(shí)現(xiàn)*全溶解。
3.平均分配和儲(chǔ)存在-20°或-70°工作原液可以進(jìn)一步稀釋10倍(5毫米，10倍)，并在4度下保存幾周。
4.當(dāng)PNA解凍時(shí)，加熱至55°中浸泡5分鐘，以實(shí)現(xiàn)*全溶解。
PCR 反應(yīng)
*下面是一個(gè)例子。實(shí)際情況可能根據(jù)序列而變化，需要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)確定。
1.準(zhǔn)備以下PCR混合。
a.25 u12x PCR混合物
b.FW和RV PCR引I物分別為最終0.2 uM
C5 UI PNA鉬來(lái)(5 UM庫(kù)存)至最終0.5uM(范圍:0.2~5 uM)
d.DNA模板:20 ng(10~50 ng)
e.水至50 uI
2.按如下方法運(yùn)行PCR程序:
a.躕鬢境騖怌擠飫負(fù)蠙旦篭故?凎榶吩憤么磔鍶墭魅窶緄絹垂攤鰳亮嗰縱麟度3 min
b放大2240循環(huán))
i.變性:94度 30 sec
i.PNA夾具:65~75度為20秒(比PNA工具計(jì)算的Tm低5~10度)
ii.底漆退火:55~65度為20秒
iv.擴(kuò)展:68度為30秒
c.擴(kuò)展:72度,10 min
d.保持在4度
3.取5uIPCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上運(yùn)行。
4.夾緊反應(yīng)中最常見(jiàn)的PNA濃度為0.4~2 UM。一般來(lái)說(shuō)，如果溶解度不受影響，更高濃度的PNA可以提供更好的夾緊效果
