為大腸桿菌開發(fā)最佳表達系統(tǒng)
根據科學界目前的信息，建議開發(fā)一種適合大腸桿菌的表達系統(tǒng)是安全的。它應由促進有效轉錄、穩(wěn)定轉錄物、使翻譯穩(wěn)定、產生真正的重組蛋白而不被截短或延伸的變體污染、保持溶解性并聚集到總細胞蛋白的約20%的DNA成分組成。這種類型的表達整合了管家啟動子s70所確認的共有啟動子，并且它可以通過整合UP元件而經歷額外的改善。誘導相鄰基因的通讀轉錄受到兩個缺乏任何因子的強轉錄終止子的串聯(lián)排列的阻礙。在轉錄物兩端發(fā)現(xiàn)的反向重復穩(wěn)定了轉錄物本身。這些重復序列可以產生莖環(huán)結構，阻礙5'端的核酸內切酶活性和3'端的核酸外切酶破壞，但它們不抑制翻譯。最后，彈性Shine-Dalgamo序列、下游8bp的AUG起始密碼子和延長的UAAU終止密碼子確保了有效的翻譯。折魯分子伴侶隨看新的多肽鏈同時表達，幫助它們折。然而，有必要指出這樣一個結論，即所有的重組蛋白都沒有一種“美生產方法。每種蛋白質都有其挑戰(zhàn)。為了實現(xiàn)高度的合成，有必要通過系統(tǒng)地調整各種參數(shù)來優(yōu)化每種情況下的工藝。
