電轉農桿菌感受態
原理
電擊法不需要預先誘導細菌的感受態，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/μg閉環DNA。
材料與儀器
農桿菌菌種
HEPES NaOH 鏈霉素 甘油
離心管 離心機 制冰機
步驟
1. 挑取單克隆接種于2 ml YEP（含50 mg/l鏈霉素）液體培養基，28℃，250 rpm，振蕩培養過夜。（如用5 mlYEP，需培養36 h）
2. 將菌液按1:100轉移至200 ml YEP（含50 mg/l鏈霉素）培養液中，28℃，250 rpm，振蕩培養至OD=0.3(約4~5 h)。
3. 轉入50 ml的無菌離心管，4℃，4 000 rpm離心10 min，棄上清。
4. 用20 ml冰浴的HEPES(1 mM，PH7.0)重懸。
5. 4℃，4 000 rpm離心10 min，棄上清。
6. 重復4、5步驟2~3次。
7. 用2 ml冰浴的10%甘油重懸。
8. 每管100 ul分裝于1.5 ml無菌的Eppendorf管中，-70℃保存。
注意事項
HEPES需現用現配。
