纖維素酶的分離純化方法
問(wèn)：本人要做纖維素酶的分離純化，請(qǐng)傳授方法。
答：纖維素酶并不是單一的蛋白酶，而是一個(gè)酶系，其中包括至少3種組分。如果你用重組菌表達(dá)其中的一個(gè)片段或者產(chǎn)酶基因，那么要看你的載體是什么？如果有親和標(biāo)簽可以用親和層析，如果沒(méi)有，那就只能考慮疏水或離子交換等方法了。不過(guò)工業(yè)上制備纖維素酶一般是不用純化的，中試以上規(guī)模的酶制劑生產(chǎn)大多采用真菌發(fā)酵，纖維素酶會(huì)直接分泌到培養(yǎng)基中，然后通過(guò)結(jié)晶就可以得到粗酶顆粒，一般不需要色譜純化。
答：3種組分可能都是說(shuō)得輕的，這每種組分可能都是多種酶組成的酶系，甚至有可能是有機(jī)組裝的分子機(jī)器--（俺猜測(cè)。。。因?yàn)槔w維素酶的協(xié)同作用還是相當(dāng)厲害的）。不同來(lái)源的纖維素酶降解纖維素的機(jī)理、側(cè)重點(diǎn)都會(huì)不相同，很多基因還沒(méi)弄清楚，基因工程不太能做，現(xiàn)在商品化的纖維素酶恐怕都是傳統(tǒng)育種方法得到的菌株。
一般采用不同的純化方式：如陰離子、陽(yáng)離子交換等，搜集每個(gè)峰去做各種酶活分析。多亞基、多組分、多種催化活性、纖維素本身又太復(fù)雜，你還要格外提防協(xié)同作用。
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