BrdU標記法檢測細胞增殖

1． 細胞以 1.5 × 10⁵ /ml 細胞數(shù)接種于直徑 35ml 培養(yǎng)皿中（內放置一蓋玻片），培養(yǎng) 1 天，用含 0.4 ％ FCS 培養(yǎng)液同步化 3 天，使絕大多數(shù)細胞處于 G₀ 期。

2． 終止細胞培養(yǎng)前，加入 BrdU （終濃度為 30 μ g/L ）， 37 ℃，孵育 40min 。

3． 棄培養(yǎng)液，玻片用 PBS 洗滌 3 次。

4． 甲醇 / 醋酸固定 10min 。

5． 經(jīng)固定的玻片空氣干燥， 0.3 ％ H₂ O₂ - 甲醇 30min 滅活內源性氧化酶。

6． 5 ％正常兔血清封閉。

7． 甲酰胺 100 ℃， 5min 變性核酸。

8． 冰浴冷卻后 PBS 洗滌，加 1 抗即抗小鼠 BrdU 單抗（工作濃度 1 ： 50 ），陰性對照加 PBS 或血清。

9． 按 ABC 法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數(shù) 10 個高倍視野中細胞總數(shù)及 BrdU 陽性細胞數(shù)，計算標記指數(shù)（ LI ）。