糖原的顯示—PAS反應(yīng)（periodic acid schiff’s reaction）

目的要求
通過PAS反應(yīng)，了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細(xì)胞中的分布。

基本原理
糖原由D-葡萄糖的分支或直鏈組成，在肝和肌肉最豐富。過碘酸是一種強(qiáng)氧化劑，能將葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二個(gè)游離醛基（—CHO），游離醛基與Schiff ‘s試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物，顏色深淺與多糖含量成正比。
由于單糖在固定、脫水和包埋等組織化學(xué)操作過程中被抽提掉，故一般組織標(biāo)本上所能顯示的糖類主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要確定此紅色物質(zhì)是否糖原還需要同時(shí)進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再進(jìn)行PAS顯色，若反應(yīng)為陰性，則表明是糖原，反之則為其他多糖。

實(shí)驗(yàn)用品
1．器材：石蠟切片機(jī)，蓋玻片、載玻片、染色缸等．
2．試劑
0.5%過碘酸溶液；Schiff‘s試劑
3．材料：小鼠肝石蠟切片

切片經(jīng)二甲苯和各級(jí)酒精復(fù)水后，入0.5%的過碘酸溶液中作用15分鐘，取出后水洗。

切片充分洗凈后入Schiff‘s試劑中進(jìn)行顯色。作用15分鐘左右，將切片取出水洗，為洗去非特異性著色，將切處理品入三級(jí)新配制的亞硫酸中進(jìn)行沖洗，取出后水洗，鏡檢。

對(duì)照片的設(shè)置
為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信性，在實(shí)驗(yàn)中需設(shè)置陰性對(duì)照片。
對(duì)照片在復(fù)水后，用唾液淀粉酶37℃水解30—60分鐘，取出后水洗，再入過碘酸處理。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)報(bào)告
繪圖表示糖元在細(xì)胞中的分布情況；
在實(shí)驗(yàn)過程中，過碘酸處理能起到什么作用，它和Feulgen反應(yīng)中Hcl的作用有何異同？