電轉(zhuǎn)感受態(tài)菌TG1的制備

1從微量培養(yǎng)基平皿中挑取單個(gè)菌落，接種于5ml 2×YT培養(yǎng)基(17g蛋白胨，10g Bactoyeast,5g NaCl，加水至1 000ml)中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜。

2取上述過夜菌1∶100稀釋接種入500ml新鮮的2×YT培養(yǎng)液中，37℃振蕩培養(yǎng)至OD=05~07，約25~3h。

3將上述帶有菌液的三角瓶置冰浴15~30min。4 000r/min 4℃離心20min。

4去上清，用500ml預(yù)冷的無菌的1mmol/L Hepes(pH值70)溶液重懸細(xì)胞沉淀。4 000r/min 4℃離心20min。

5 4℃離心20min，用10ml含有10%甘油的1mol/L Hepes(pH70)溶液重懸細(xì)胞。

6 4 000r/min 4℃離心，最后用1ml 10%甘油重懸細(xì)胞沉淀，總量約2ml左右。

7分裝小管，每管100μl，置于冰浴待用，或立即凍于干冰中，存放于-70℃。