Foxp3: Treg的主要調節因子

Foxp3是控制Treg細胞發育和功能的關鍵轉錄因子之一，它的發現是Treg免疫生物學重要的進步，為人們進一步了解Treg功能和作用機制打開了一扇“門”。雖然人們也發現Treg發育和功能也需要其他轉錄因子如AhR和STAT5的參與，但是Foxp3仍舊是Treg細胞系的主要調節因子。實驗表明，在體外或體內誘導初始T細胞表達FoxP3后可以出現Treg樣的免疫抑制作用，表明Foxp3是控制免疫抑制分子表達的關鍵因素；因此，闡明Foxp3的分子靶點是透徹理解Treg免疫抑制作用的必要條件之一。

Reagents for Foxp3 Detection
檢測Foxp3的試劑 (上海鑫樂生物提供eBioscience公司全系列產品)

EBioscience利用蛋白表位圖譜構建抗體來檢測Foxp3。

用Foxp3鑒定Treg細胞

通過流式抗體標記CD4+CD25+Foxp3+細胞可以容易的鑒定小鼠脾臟細胞和人PBMC中Treg。一般情況下，CD4+CD25+細胞和Foxp3+細胞相關性接近100%。在特定條件下Foxp3+Treg細胞會下調Foxp3表達，從而喪失免疫抑制功能，表現出Th1、Th2和TFH等具有傳統功能的細胞亞群。導致Foxp3下調的關鍵因素包括高水平的炎癥因子內環境，如可誘導效應性T細胞產生的細胞因子：IL-6和IFN-gamma。

Tregs 細胞中Foxp3的表達

分析CD4+CD25+ Treg 細胞中Foxp3 +細胞群表明與Foxp3+Treg完全重合。

使用Foxp3鑒定Treg
用Anti-Mouse CD4 FITC、Anti-Mouse CD25 APC和Anti-Mouse/Rat Foxp3 PE 標記BALB/c小鼠 脾細胞. 右上象限是Tregs 細胞：CD4+Foxp3+ cells (左) and CD25+Foxp3+ cells (右).

在全血中檢測Foxp3
eBioscience has simplified the analysis of Foxp3 in human whole blood. With the Foxp3 Whole Blood Staining Kit, it's now possible to analyze Foxp3 expression without isolating PBMCs from whole blood. The Foxp3 Whole Blood Staining Kit includes the PE-conjugated PCH101 clone for human Foxp3 and staining buffers specifically designed for fixation and permeabilization of cells in whole blood, resulting in robust detection of human Foxp3 expression.

eBioscience公司將全血Treg染色方法簡化為一個試劑盒——人全血Treg染色試劑盒（cat#88-8996-40，由上海鑫樂生物提供），科研人員可以使用該試劑盒直接檢測人類全血中的Treg，而無需分離PBMC。此外，該試劑盒成分齊全，完全滿足Treg染色需要。
試劑盒組成及供應高
eBioscience 1X 紅細胞裂解液：200 ml---上海鑫樂生物
eBioscience 流式染色液：600 ml---上海鑫樂生物
eBioscience 固定破膜濃縮液：30 ml---上海鑫樂生物
eBioscience 固定破膜稀釋液：100 ml---上海鑫樂生物
Anti-human Foxp3 PE (PCH101)：25 tests

全血Foxp3染色結果
Foxp3免疫組化鑒定

到目前為止，一般認為Foxp3僅限于T細胞系表達。然而，也有證據表明腫瘤細胞也可以表達Foxp3，因此Foxp3也被作為人類惡性腫瘤生物標志物和預后判斷參考因素。有文獻報道，FoxP3+ Treg細胞存在與否與卵巢癌預后有直接的關系，人們發現腫瘤部位的Foxp3+Treg 可以抑制機體抗腫瘤免疫反應從而減低病人的存活率。此外，不管是外周血還是腫瘤浸潤部位Foxp3+Treg數目都與乳腺癌病人預后好壞有著高度的相關性。由Foxp3在Treg抑制功能中的核心作用來看，一些腫瘤細胞表達Foxp3似乎可以抑制機體對腫瘤細胞的免疫反應，從而導致腫瘤細胞的免疫逃逸。

除了用流式細胞技術檢測Foxp3之外，有報道稱可以用eBioscience Foxp3抗體對脾臟、乳腺、黑素瘤及其他組織進行免疫組化染色（冰凍切片和石蠟切片）。

C57BI/6 小鼠脾臟染色
使用anti-mouse/rat Foxp3 抗體(克隆號：FJK-16s)標記C57BL/6小鼠脾臟冰凍切片，用Cintia De Paiva照相。

人類扁桃體組織染色
用anti-human Foxp3 (PCH101)標記人扁桃體組織， 使用Roger Sutmuller照相

淋巴細胞和腫瘤細胞染色

參考文獻
Mouse Foxp3
Biller, BJ., et al. 2007. Use of FoxP3 expression to identify regulatory T cells in healthy dogs and dogs with cancer. Vet Immunol Immunopathol. 116(1-2):69-78. [Intracellular staining for flow cytometry using FJK-16s in canine]
Sakaguchi, S. et al. 2005. Treatment of advanced tumors with agonistic anti-GITR mAb and its effects on tumor-infiltrating Foxp3+CD25+CD4+ regulatory T cells. J. Exp. Med. 202: 885-891. [Intracellular staining for flow cytometry using FJK-16s]
Fields, ML., et al. 2005. CD4+CD25+Regulatory T Cells Inhibit the Maturation but Not the Initiation of an Autoantibody Response. J. Immunol. 175: 4255 - 4264. [Intracellular staining for flow cytometry using FJK-16s]

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