細胞凍存的程序降溫盒的使用注意事項

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細胞凍存有兩種方法：傳統的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降溫方法是利用程序降溫盒設定程序由室溫降低至-80℃，最后再放置到液氮槽中長期保存。程序降溫盒的使用注意事項如下：

實驗室雖然有程序降溫凍存盒，但怎么使用一直都搞不明白，我覺得是不是應該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間(細胞剛開始還沒凍的時候就是室溫)，然后把細胞放進去，再一起移到-80度，這樣才能實現程序降溫呢? 時間使用長了，感覺里面的液體是不是異丙醇啊，使用時間長了會不會揮發或變質什么的，要不要添加或維護一下呢，還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分，要補充嗎?

經驗1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于最底線。4 a. C* D8 Y& P9 A, y

凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進去細胞，置于-80，利用異丙醇實現梯度降溫啊。) ~0 O( O# Q* }: w# D" R' _

根據論壇里的討論，異丙醇使用過一段時間后是要更換的，但是我一直沒換過，也沒發現很大問題。

經驗2：我們實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮，貴重的細胞盡快轉移，不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。

經驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數據：眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!

經驗4：應該不可以把凍存盒放4°的，因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來的凍存盒應該現在室溫靜置一段時間待其恢復到室溫再使用。而其中的異丙醇應使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達到刻度線，否則降溫效果會受到影響。

經驗5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對環境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO 對細胞有毒性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉入液氮。

程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細胞凍存的存活率，由于程序降溫盒內存在100%濃度的異丙醇和泡沫內襯，因此程序降溫盒也可以用于細胞復蘇

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