基底動脈平滑肌細胞原代培養(yǎng)

培養(yǎng)液：MEM(GIBCO)，20％FBS，雙抗100IU／ml；

原代細胞培養(yǎng)：取5kg左右兔空氣栓塞法處死后斷頭，于無菌條件下從枕大孔處用大止血箝扳開顱骨暴露并小心取出腦組織放入裝有DMEM的培養(yǎng)皿中，用眼科鑷分離基底動脈后按常規(guī)平滑肌方法貼塊培養(yǎng)。

傳代：

（1）吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

（2）D-Hanks液沖洗2遍。

（3）加入消化液少許，以能覆蓋瓶底為限。

（4）倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細胞胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大時，立即終止消化。

（5）吸除消化液，向瓶底注入D-Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉。

（6）用吸管吸取培養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液；首次傳代將原代細胞按1：1傳代，此后按1：3進行傳代。

（7）傳代后細胞放置在37℃，5%CO2孵育箱內(nèi)培養(yǎng)。

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