小牛肺動脈平滑肌細(xì)胞的首次傳代

1、傳代前24h先將組織塊去除：等到細(xì)胞覆蓋瓶底80％以上后進(jìn)行組織塊去除操作。可用彎頭玻璃吸管將組織塊輕輕挑起吸出，確保無組織塊留下，以防壞死污染。

2、胰酶消化：倒掉舊培養(yǎng)液，用D－HANKs液清洗兩邊，加入已預(yù)熱（37度）10min的0.25％胰酶消化液2ml，2－3min后鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)收縮，細(xì)胞間隙增大，立即用含胎牛血清的培養(yǎng)液終止消化。

3、彎頭吸管吹打細(xì)胞：吹打一定時(shí)間后到鏡下觀察，在沒吹打起細(xì)胞區(qū)域繼續(xù)吹打，動作要柔和。

4、離心：2000轉(zhuǎn)5min。倒掉上清液，加入培養(yǎng)液，吹打成散在細(xì)胞。

5、計(jì)數(shù)和接種。

6、貼壁后更換培養(yǎng)液：由于消化不當(dāng)或其他原因，接種后的細(xì)胞可能會有死細(xì)胞及其他雜質(zhì)影響細(xì)胞生長，所以貼壁后（一般6h）要更換培養(yǎng)液。

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