HT1080細(xì)胞的傳代經(jīng)驗(yàn)

做好準(zhǔn)備工作之后，先把舊的培養(yǎng)基倒掉。再用PBS洗兩遍，然后加0.05%胰酶/EDTA，劑量根據(jù)培養(yǎng)瓶大小定，一般是25cm 2 的瓶子大約0.8-1ml，輕搖10——15秒，使消化液均勻覆蓋瓶底即可，再倒掉。置培養(yǎng)箱3-5分鐘(看消化效果而定)，等大部分細(xì)胞呈流沙狀滑落時(shí)，即加入培養(yǎng)基終止消化，一般以1:5左右的比例傳代(視計(jì)數(shù)結(jié)果和看細(xì)胞長(zhǎng)滿的程度而定)。

這種方法養(yǎng)比較頑強(qiáng)的細(xì)胞很好，既節(jié)省步驟，也降低了離心和較長(zhǎng)時(shí)間消化對(duì)細(xì)胞帶來(lái)的損傷，其實(shí)大家也可以試試用這種方法養(yǎng)別的細(xì)胞。

主要做的還是養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(MSC)，做好準(zhǔn)備工作：

1、倒掉舊培養(yǎng)基;

2、PBS洗兩遍(如果能很容易就洗去雜質(zhì)和懸浮的死細(xì)胞，洗一遍也可以);

3、加0.05%胰酶/EDTA，(劑量同上)，置培養(yǎng)箱3分鐘(看效果而定)，待大部分細(xì)胞呈流沙狀滑落時(shí)，加入一定量培養(yǎng)基(為了計(jì)數(shù)和按比例傳代操作方便)終止消化反應(yīng)，輕吹勻幾次，吸取細(xì)胞懸液至15ml離心管(留一滴計(jì)數(shù))，1400rpm/10分鐘，棄懸液，加入一定量培養(yǎng)基，一般按1:3傳，大概每5天左右傳一次。

以上操作均應(yīng)注意無(wú)菌。

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