293T細(xì)胞的培養(yǎng)

細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)長(zhǎng)滿達(dá)到80％時(shí)就要傳代，一傳二，24小時(shí)后再傳代。48小時(shí)傳就不好了，如果在24小時(shí)后細(xì)胞沒(méi)有長(zhǎng)到80％，應(yīng)該換新的培養(yǎng)基，不然，培養(yǎng)基變黃，細(xì)胞脫落。

細(xì)胞消化：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立放置，吸走培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中的脫落細(xì)胞較多，說(shuō)明細(xì)胞現(xiàn)在很容易脫落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，來(lái)回輕微晃動(dòng)培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞完全脫落，加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清），混勻，不能吹打，分裝2瓶，如果細(xì)胞沒(méi)長(zhǎng)滿就脫落，則只需加入5mlMEM，不分裝。如果培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞貼壁較牢固，培養(yǎng)基上清沒(méi)有細(xì)胞脫落碎片，且細(xì)胞長(zhǎng)滿達(dá)到80％以上，吸走培養(yǎng)基，加入5ml的PBS+EDTA(0.02%)，迅速輕微晃動(dòng)，豎立培養(yǎng)瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超過(guò)3min，細(xì)胞完全消化脫壁，取出加入10ml培養(yǎng)基輕微吸打混勻，分裝2瓶。

培養(yǎng)基：MEM(GIBCO)+10%胎牛血清（杭州四季青）＋雙抗

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