細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)和技術(shù)
1、細(xì)胞（組織）培養(yǎng)年鑒
1878 Claude Bernard:證明一個(gè)器官的生理系統(tǒng)在個(gè)體死亡以后仍然可以人工維持。
1885 Wilhelm Roux:在一個(gè)生理溶液中維持一快雞胚的活性并觀察其發(fā)育，從而證實(shí)該發(fā)育與雞胚的其他部分無關(guān)。
1887 Ross Harrison:利用凝固的青蛙淋巴液作為培養(yǎng)基，在體外培養(yǎng)青蛙神經(jīng)嵴，維持其活性達(dá)數(shù)星期，并觀察到了神經(jīng)纖維的生長，從解決了神經(jīng)纖維的來源問題。Ross Harrison被人稱為細(xì)胞培養(yǎng)之父。
1910 Burrows:率先在血漿凝塊中長期培養(yǎng)雞胚細(xì)胞.
1911 Lewis & Lewis:由海水、血清、胚胎提取物和鹽和蛋白胨為原料配制成了第一個(gè)人工的細(xì)胞培養(yǎng)液，并觀察到了單層細(xì)胞的有限生長。
1916 Rous & Jones:開創(chuàng)使用胰酶來收獲貼壁生長的細(xì)胞。
1923-1931 Carrel & Baker:研制T型培養(yǎng)瓶大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞。
1927 Carrel & Rivera:制造了第一個(gè)病毒疫苗：牛痘疫苗。
1933 Gey: 發(fā)明了轉(zhuǎn)管培養(yǎng)細(xì)胞的技術(shù)。
1948 Fisher: 研制成了第一個(gè)化學(xué)成分清楚的細(xì)胞培養(yǎng)液CMRL1006，該培養(yǎng)液至今還在使用。
1952 Gey 和同事：分離培養(yǎng)了Hela細(xì)胞。
1952 Dulbecco:發(fā)明了噬斑法，用長滿的單層細(xì)胞檢測病毒。
1954 Abercrombie: 觀察到了體外培養(yǎng)細(xì)胞接觸抑制的現(xiàn)象。
1961 Hatflick & Moorhead：顯示人成纖維細(xì)胞在一定的代數(shù)之后會(huì)死亡。
1965 Ham:配制了第一個(gè)無血清培養(yǎng)液。
1975 Kohler & Miltein:成功的得到了第一個(gè)用于單抗生產(chǎn)的雜交瘤細(xì)胞株。
2、怎樣查到一個(gè)特定細(xì)胞株的相關(guān)知識(shí)和培養(yǎng)條件？
ATCC (American Type Culture Collection) 收集了絕大多數(shù)常用細(xì)胞的詳細(xì)資料。
打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫。
數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述，包括細(xì)胞的來源，培養(yǎng)和凍存條件，顯微形態(tài)以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。
3、為什么大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)需要用二氧化碳培養(yǎng)箱?
一般細(xì)胞培養(yǎng)液的pH在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng)（它是人體血液中最重要的pH緩沖系統(tǒng)），所以大多數(shù)培養(yǎng)液用它來保持穩(wěn)定的pH。用粉末配制培養(yǎng)液時(shí)，常常需要加入一定量的碳酸氫鈉。
對(duì)大多數(shù)以碳酸鹽作為pH緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)液而言，以為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以保持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。同時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)的器皿需要一定程度的透氣，以便于氣體的交換。
是不是采用其他pH緩沖系統(tǒng)就不需要二氧化碳培養(yǎng)箱了呢？人們發(fā)現(xiàn)由于空氣中的二氧化碳濃度很低，如果細(xì)胞不在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液中的HCO3-會(huì)被耗盡，這樣會(huì)影響細(xì)胞的正常生長。所以大部分動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，還是需要二氧化碳培養(yǎng)箱。
細(xì)胞培養(yǎng)液中常附加其他的pH緩沖系統(tǒng)，比如HEPES緩沖系統(tǒng)，來增加pH緩沖能力。HEPES在pH7.2-7.4之間有很強(qiáng)的緩沖能力，當(dāng)透氣的培養(yǎng)器皿被拿到二氧化碳培養(yǎng)箱外面的時(shí)候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養(yǎng)液中碳酸鹽緩沖系統(tǒng)就會(huì)失去效果，這時(shí)候HEPES緩沖系統(tǒng)就能繼續(xù)保持pH的穩(wěn)定。
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