少突膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)
少突膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)源于1-2 天的大鼠。斷頭后大鼠大腦收集到Ham’s F-12培養(yǎng)液中，移除腦膜和血管。皮質(zhì)用機(jī)械勻漿進(jìn)行勻漿然后將細(xì)胞懸液依次通過(guò)230μm和104μm尼龍網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾。細(xì)胞通過(guò)1000rpm 7分鐘離心進(jìn)行收集，用添加12.5%胎牛血清的DMEM進(jìn)行重懸細(xì)胞。最后以2.0×105 cells/cm2濃度將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿維持在37°C，5%CO2潮濕環(huán)境中。3天后更換培養(yǎng)基，以后每?jī)商旄鼡Q一次。9-11天后細(xì)胞能夠鋪滿培養(yǎng)皿。少突膠質(zhì)細(xì)胞祖代生長(zhǎng)在星形膠質(zhì)細(xì)胞層的上面然后運(yùn)用旋轉(zhuǎn)搖床以260rpm 18小時(shí)搖蕩分離，通過(guò)30μm的尼龍網(wǎng)過(guò)濾，然后細(xì)胞懸液接種到含無(wú)血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。
培養(yǎng)基成分：DMEM-Ham‘s F-12混合物（1:1），10mM HEPES，0.1%牛血清蛋白，25μg/mL 人鐵轉(zhuǎn)蛋白，30nM三碘甲狀腺氨酸，20nM氫化可的松，20nM黃體酮，10nM 維生素H，5μg /mL胰島素，16μg/mL腐胺，30nM硒，50U/mL 青霉素和50μg/mL 鏈霉素，還含有2.5ng/mL 血小板源性生長(zhǎng)因子AA和2.5ng/mL 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子用于刺激少突膠質(zhì)細(xì)胞增殖。培養(yǎng)基每?jī)商旄鼡Q一次。
如果在沒有血小板源性生長(zhǎng)因子AA和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的存在情況下，原始的少突膠質(zhì)細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中分化成少突細(xì)胞，3天后添加3%胎牛血清。原始細(xì)胞和成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞都能用于確定神經(jīng)毒性。
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