細(xì)菌感受態(tài)的制備和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
通過(guò)實(shí)驗(yàn)學(xué)會(huì)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法和DNA轉(zhuǎn)化的最基本操作，以及如何提高轉(zhuǎn)化效率的思路。本實(shí)驗(yàn)綜合因素較多，難度較大，是分子生物學(xué)中的一個(gè)很關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)手段。
實(shí)驗(yàn)原理
轉(zhuǎn)化是指某一細(xì)胞系由于接受了外源DNA，而導(dǎo)致其原來(lái)的遺傳性狀發(fā)生改變，這種遺傳性狀包括遺傳型和表型的改變。
感受態(tài)是受體菌能接受外源DNA能力的一種生理狀態(tài)。用CaCl2處理細(xì)菌，改變細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，使質(zhì)粒DNA能夠穿過(guò)細(xì)菌細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞。然后在選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉(zhuǎn)化處理過(guò)的細(xì)菌，轉(zhuǎn)化成功的細(xì)菌可以在選擇性培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成菌落。
本實(shí)驗(yàn)采用質(zhì)粒pUC118轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH-5a，通過(guò)氨芐青霉素抗性篩選轉(zhuǎn)化子。
圖1-1　　質(zhì)粒pUC118/pUC119圖譜
實(shí)驗(yàn)材料和試劑
（一）實(shí)驗(yàn)材料
大腸桿菌DH-5a
質(zhì)粒pUC118（ampicillin，AmpR）???
（二）培養(yǎng)基和試劑
1. LB液體培養(yǎng)基(%)
胰蛋白胨（Tryptone） 0.5
酵母浸出粉（Yeast extract） 1.0
NaCl 0.5
pH 7.2～7.4（用2mol/L NaOH調(diào)節(jié)）
（分裝：20ml/250ml三角瓶，每組2瓶。3ml/試管，每組2管。0.07Mpa高壓滅菌30分鐘）。
2. LB固體培養(yǎng)基
LB液體培養(yǎng)基加入1.6%的瓊脂粉即可。
（分裝：50ml/250ml三角瓶，加入0.8克瓊脂粉，每組1瓶。0.07Mpa高壓滅菌30分鐘）。
3. 抗生素：氨芐青霉素（ampicillin,，Amp），配制成100mg/ml備用。
4. 0.1mol/L CaCl2溶液
(配制方法：稱(chēng)取1.1克無(wú)水CaCl2，溶于90ml蒸餾水中，定容至100ml，裝于250ml三角瓶中，0.07Mpa高壓滅菌30分鐘，4℃保存。）

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