酶標(biāo)儀基本知識(shí)及其檢測原理

光是電磁波，波長100nm-400nm稱為紫外光，400nm-780nm之間的光可被人眼觀察到，大子780nm稱為紅外光。

人們只所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。

綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂樟斯庵械募t色光譜。

酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。

檢測單位：

光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。

檢測單位用OD值表示，OD是opticaldelnsity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度，OD=10g（1/trans），其中trans為檢測物的透光值。

根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：

E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表示被吸收的光密度，Ⅰ0為在檢測物之前的光強(qiáng)度，Ⅰ為從被檢測物出來的光強(qiáng)度。

OD值由下述公式計(jì)算：

E=OD=C×D×E

其中：C為檢測物的濃度；D為檢測物的厚度；E為摩爾因子。

在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長，在此波長下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。

如果選擇其它的波長段，就會(huì)造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。

因此，在測定檢測物時(shí)，我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測，稱為測量波長。

但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個(gè)參照波長，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。

在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。

Anthos酶標(biāo)儀檢測值計(jì)算

儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào)，最大為4095.儀器定義沒有光源下的透光值為0%，沒有檢測物的透光值為100%。

則實(shí)際檢測中，檢測物的透光值均在0%一100%之間。

透光值的計(jì)算如下：

T=（Meas-Min）/（Max-Min）

其中T為透光值，Meas為檢測的二進(jìn)位數(shù)值，Min為在0%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，Max為在100%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：

Anthos酶標(biāo)儀的中心定位

儀器會(huì)自動(dòng)對酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。

在對每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測時(shí)，儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測量，選取最中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。

光源的參照通道

參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。

酶標(biāo)儀的用途和其它提示

用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室，包括臨床實(shí)驗(yàn)室。

質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。

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