正確使用DEPC

DEPC有致癌性，不能處理Tris溶液等這些事項(xiàng)大家都知道，所以不談。談一些實(shí)驗(yàn)室中的操作誤區(qū)。

誤區(qū)一：重復(fù)使用含DEPC的水處理槍頭、離心管等。由于DEPC較貴，而且書上說DEPC要用高壓滅菌處理去除，于是有些人就萌發(fā)了重復(fù)使用DEPC的想法，即對(duì)含有DEPC的水不進(jìn)行高壓滅菌，從而重復(fù)使用含DEPC的水處理槍頭、離心管等。節(jié)約本是好事，但這樣的節(jié)約是無效的。為什么不能重復(fù)使用含DEPC的水，因?yàn)镈EPC在水溶液中不穩(wěn)定，極易分解，DEPC在pH6.0和pH7.0的PBS緩沖液中的半衰期分別約為20min和10min，DEPC在水中的半衰期約為30min。因此，重復(fù)使用含DEPC的水就不能保證槍頭和離心管的RNase-free。

誤區(qū)二：必需長時(shí)間高壓滅菌來徹底去除DEPC。用DEPC處理過的溶液，在15－20min的高壓滅菌后還可以聞到一股特殊的香味，因此有人認(rèn)為高壓滅菌去除DEPC不徹底，所以要延長高壓滅菌的時(shí)間以完全去除DEPC。但是延長高壓滅菌的時(shí)間并不需要，因?yàn)槁劦降奶厥庀阄恫皇荄EPC的，而是DEPC分解產(chǎn)物之一的乙醇同溶液中殘留的微量的羧酸（如甲酸和乙酸等）反應(yīng)產(chǎn)生的揮發(fā)性脂類。這種特殊的水果香味不代表有痕量的DEPC殘留。

誤區(qū)三：溶液中DEPC含量約高，滅活RNase的效果越好。這個(gè)誤區(qū)錯(cuò)了一半，的確，1% DEPC能滅活高達(dá)1000 ng/ml的RNase A，而0.1% DEPC只能滅活少于500 ng/ml的RNase A。但是溶液中殘留的DEPC副產(chǎn)物會(huì)抑制一些酶反應(yīng)，例如DEPC副產(chǎn)物會(huì)抑制體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，因此DEPC含量越高，高壓滅菌后的DEPC副產(chǎn)物就越多，抑制越明顯。