UVB致皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的損傷模型的制作方法

材料和方法

1 試劑:胎牛血清(北京軍醫(yī)獸醫(yī)防治中心) ,DMEM培養(yǎng)液(GIBCO ,美國(guó)) ,碘化丙啶PI(Sigma) ,Triton2X100 (BDH) ,Hoechst33342(Sigma) ,RNase (Sigma) 。

2 細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)分組:人角質(zhì)形成細(xì)胞株Colol6 (由北京師范大學(xué)生物系提供) 。分單純對(duì)照、單純照射、給藥后照射、照射后給藥4 組。給藥后照射組為在照射前24 h 給藥,照射后24 h 進(jìn)行檢測(cè),照射后給藥組為在照射后立即給藥,照射后24 h 進(jìn)行檢測(cè)。

3 紫外光源及照射條件:光源為UVB 紫外燈管(上海金光燈具廠,6W) ,劑量率為6J?m- 2?min - 1 (由吉林大學(xué)環(huán)境衛(wèi)生教研室進(jìn)行測(cè)量) 。

4 藥物種類(lèi):人參三醇組甙、Rg1、Rb1 由吉林大學(xué)有機(jī)化學(xué)教研室提供。

5 細(xì)胞周期:胰酶消化貼壁細(xì)胞,接種于24 孔平底培養(yǎng)皿中(5 ×105 細(xì)胞P孔) ,每孔先加300μl DMEM 培養(yǎng)液(含15 %胎牛血清) ,待紫外線照射后,加至1 ml ,置37 ℃、5 %CO2孵箱中。收集細(xì)胞, 0101 molPL PBS 洗2 次, 加RNase (011mgPml) 100μl ,100μl PI(含Triton2X100) 單染37 ℃、30 min 避光保存,用流式細(xì)胞儀FACScan (Becton Diskinson ,美國(guó),氬離子激光激發(fā),波長(zhǎng)488 nm) 檢測(cè),每個(gè)樣品收集1 ×104 個(gè)細(xì)胞,數(shù)據(jù)采集分析軟件為ModFit LT。

6 細(xì)胞凋亡:加入100μl Hoechst33342 ,再加100μl PI(不含Triton2X100) ,0 ℃、陰暗處放置30 min ,用流式細(xì)胞儀收集1 ×104個(gè)細(xì)胞,Cellquest 軟件分析結(jié)果。
參見(jiàn)：金光輝,人參組甙對(duì)紫外輻射致皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
另請(qǐng)參見(jiàn)：
夏濟(jì)平. 宋秀祖. 畢志剛. 茶多酚對(duì)紫外線輻射后的角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增生影響的保護(hù)作用.臨床皮膚科雜志 2003年05期