球體細胞培養(yǎng)

球體細胞培養(yǎng)
1. 瓊脂鋪底的培養(yǎng)瓶：30ml無菌培養(yǎng)瓶，每瓶中加5 ml 2%瓊脂培養(yǎng)基，冷卻，形成平坦底層后備用。
2.取生長狀態(tài)良好已連接成片的細胞，用彎頭吸管伸入瓶內(nèi)，把細胞縱橫割劃成若干小區(qū)后，倒出培養(yǎng)液。
3.加入0.25%的胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下邊消化邊觀察，當細胞小區(qū)邊緣微卷起后便立即終止消化，倒出消化液，用Hanks輕輕漂洗一次，加入新培養(yǎng)液3~5 ml，用吸管把已松動的細胞片吸打下來，分裝入1~3個含2%瓊脂培養(yǎng)基底層的培養(yǎng)瓶中，置溫箱繼續(xù)培養(yǎng)，數(shù)日后便可生長成細胞球體。
4.換液：培養(yǎng)1~2日后，如需換液，微傾斜培養(yǎng)瓶，令培養(yǎng)液集于培養(yǎng)瓶底角，停片刻，待球體細胞下沉后，吸除部分培養(yǎng)液，再補充新培養(yǎng)液。