細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用檢測(cè)法7：?jiǎn)渭?xì)胞CMC試驗(yàn)

單細(xì)胞 CMC 試驗(yàn)

1． 用細(xì)胞培養(yǎng)液等量混合效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞， 30 ℃水浴 10 分鐘。室溫中 250 × g 離心 5 分鐘，去上清液。同量靶細(xì)胞不加效應(yīng)細(xì)胞同樣處理作為對(duì)照。

2． 用少量細(xì)胞培養(yǎng)液輕輕懸浮細(xì)胞，吸管上下吹打 5 ～ 6 次。這一分散細(xì)胞的步驟關(guān)系到試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，應(yīng)當(dāng)設(shè)法保持技術(shù)的一致性。取少許細(xì)胞懸液，稀釋后直接在顯微鏡下計(jì)數(shù)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞的結(jié)合率，即平均每 100 各淋巴細(xì)胞中結(jié)合了靶細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)目。

3． 其余的細(xì)胞懸液與等量液態(tài)（ 37 ℃）的 0.5 ％低熔點(diǎn)瓊脂糖混合均勻，鋪在培養(yǎng)皿中，厚度≤ 2mm 。固化后小心加入適量細(xì)胞培養(yǎng)液覆蓋瓊脂糖層，置 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 1 ～ 4 小時(shí)。

4． 吸去培養(yǎng)液，加入適量 0.1 ％臺(tái)盼藍(lán)覆蓋瓊脂糖層，室溫染色 5 分鐘。吸去染色液，加入適量 0.2 ％甲醛覆蓋瓊脂糖層，室溫固定 5 分鐘。

5． 在顯微鏡下死亡細(xì)胞呈藍(lán)色，計(jì)數(shù)靶細(xì)胞的死亡率。靶細(xì)胞的自發(fā)死亡率可以從經(jīng)同樣處理的靶細(xì)胞對(duì)照培養(yǎng)皿中測(cè)得。如區(qū)分效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞有困難，可以用雙醋酸熒光素染色加以區(qū)分。鏡下計(jì)數(shù)。