植物體內(nèi)可溶性糖含量的測(cè)定(蒽酮法)
一 、目的：
糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。不同載培條件，不同成熟度都可以影響水果、蔬菜中糖類的含量。因此對(duì)水果、蔬菜中可溶性糖的測(cè)定，可以了解和鑒定水果、蔬菜品質(zhì)的高低。
二、原理
糖類遇濃硫酸脫水生成糖醛或其衍生物，反應(yīng)如下：
糠醛或羥甲基糠醛進(jìn)一步與蒽酮試劑縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色物質(zhì)，其在可見光區(qū)620nm波長處有最大吸收，且其光吸收值在一定范圍內(nèi)與糖的含量成正比關(guān)系。
此法可用于單糖、寡糖和多糖的含量測(cè)定，并具有靈敏度高，簡(jiǎn)便快捷，適用于微量樣品的測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。
三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑
1.材料：白菜葉、柑桔
2.儀器：分光光度計(jì) 恒溫水箱 20ml具塞刻度試管（3支）漏斗100ml容量瓶 刻度試管 試管架 剪刀 研缽
3.試劑：
（1）200μg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖：AR級(jí)葡萄糖100mg，蒸餾水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮試劑：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光處貯藏；
（3）濃硫酸。
四、實(shí)驗(yàn)方法
1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
取6支20ml具寒試管，編號(hào)，按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮試劑，再緩慢地加入5ml濃H2 SO4 ，搖勻后，打開試管塞，置沸水浴中煮沸10分鐘，取出冷卻至室溫，在620nm波長下比色，測(cè)各管溶液的光密度值（OD），以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，光密度值為縱坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.樣品中可溶性糖的提取
稱取1克白菜葉，剪碎，置于研缽中，加入少量蒸餾水，研磨成勻漿，然后轉(zhuǎn)入20ml刻度試管中，用10ml蒸餾水分次洗滌研缽，洗液一并轉(zhuǎn)入刻度試管中。置沸水浴中加蓋煮沸10分鐘，冷卻后過濾，濾液收集于100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻備用。
3.糖含量測(cè)定
用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度試管中，加1ml水和0.5ml蒽酮試劑。再緩慢加入5ml濃H2 SO4 （注意：濃硫酸遇水會(huì)產(chǎn)生大量的熱?。w上試管塞后，輕輕搖勻，再置沸水浴中10分鐘（比色空白用2ml蒸餾水與0.5ml蒽酮試劑混合，并一同于沸水浴保溫10分鐘）。冷卻至室溫后，在波長620nm下比色，記錄光密度值。查標(biāo)準(zhǔn)曲線上得知對(duì)應(yīng)的葡萄糖含量（μg）。
五、結(jié)果計(jì)算
六、附注
（1）加濃H2 SO4 時(shí)應(yīng)緩慢加入，以免產(chǎn)生大量熱量而爆沸，灼傷皮膚，如出現(xiàn)上述情況，應(yīng)迅速用自來水沖洗。
（2）水浴加熱時(shí)應(yīng)打開試管塞。
