樹突狀細胞培養操作步驟
準備補充劑
將補充劑混合物在 15~25℃ 解凍。在無菌條件下用移液槍小心地將補充劑混合物混勻。然后，把補充劑混合物全部加到基礎培養基中。蓋上瓶子，輕輕混勻直到形成均一的混合物。DC生成培養基所附帶的相應的細胞因子組合包含有成分A和B，它們都是以100X 的原液狀態運輸的。
注意：此時不要將化合物B加入培養基中。
DC基礎培養基不帶細胞因子，因此使用時必須另外自行添加。
新鮮分離的單核 DC 細胞的傳代
對于新鮮分離自外周血單核細胞或者單個核細胞的單核樹突狀細胞的傳代 ，P romoCell 建議使用樹突狀細胞生成培養基 DXF（C-28052）。詳情如下：
1、使細胞附著（第 0 天）
新分離的細胞接種到適量的 PromoCell DC 生成培養基DXF中（不含細胞因子）。單核細胞的接種密度為200-300萬/cm2，純化的單核細胞則為50萬/cm2。在37℃和5%的CO2 的培養箱中培養1小時。
2、清洗附著的細胞（第 0 天）
用力晃組織培養皿使未附著的細胞脫落并吸去。用溫熱的 PromoCell DC 生成培養基 DXF（不含細胞因子）洗三次， 吸走 上清液。
3、開始分化為不成熟的單核 DC 細胞（第 0 天）
加入適量的混有 1x 化合物 A 的 P romoCell DC 生成培養基 DXF，在 37 ℃和 5 %的 CO2 的培養箱中培養3天。
4、更換培養基（第 3 天）
在第3天的時候更換 培養基：從細胞中吸走培養基，收集在一個離心管中。然后立刻吸取新鮮的與1x化合物A混合的DC生成培養基DXF加入到細胞中。在 180g 的離心力條件下離心10分鐘。棄去上清液，然后小心地用少量新鮮的培養基重懸細胞。將離心管中的重懸的細胞和組織培養皿 中的新鮮培養基中的細胞混合。將未成熟的單核 DC 細胞在 37℃ 和 5%的 CO2的培養箱中再培養 3 天。
注意：附著的松散附著的和未附著的細胞在這一階段都能看見。未成熟的細胞，也稱為含蓄的細胞，它們的外觀看起來是不規側的樹干狀的細胞，偶爾有大型的細胞質突起。它們呈現 CD45+/CD83-的表現型，對 CD14 染色顯示陰性至弱陽性。
5、完成單核 DC 細胞的成熟過程（第 6 天）
第6天在培養后的培養基中加入適量化合物B原液（混合后化合物B的終濃度為1x）以完成單核DC細胞的成熟過程。不要更換培養基，在37℃和5%的 CO2的培養箱中再培養24-48小時。
6、收獲成熟的單核 DC 細胞（第 7/8 天）
反復上下吹洗幾次以吹打松散附著的細胞。將含有細胞的培養基轉移到 50ml 的離心管中。用180g 的離心條件下將收貨的單核 DC 細胞離心10分鐘，棄去上清液。
注意：成熟的單核 DC 細胞都是非貼壁細胞，由于他們有多個螺旋狀樹突，而表現出奇特的形態。
7、進行您的工作
重懸并計算細胞，您現在可以用單核DC細胞進行下一步的工作。另外，可以用流式細胞儀檢測 CD14，CD45 和 CD83 來驗證樹突狀細胞的免疫表現型。
注意：使用混合有細胞因子包的 PromoCell 的 DC 生成培養 基DXF傳代得到的成熟單核 DC 細胞的表面抗原形態為 CD14-/CD45+/CD83+。
相對應細胞形態一覽表
DC的主要特點：
? 不需要磁珠等復雜方式分離提純血細胞
? 細胞誘導增殖速度快，整個過程僅需7-8天
? 操作過程簡單，只要嚴格操作就能拿到最好的誘導效果
? 既可以培養新鮮分離的單核細胞，也能適用于凍存的單核細胞
? 共有三種方案可以實現單核細胞向樹突狀細胞的轉變
? 無血清，無動物源性，化學成分確定
? 誘導效果確切
DC的優點：
? 使用成本低，操作簡單
? 降低污染風險
? 批間差異最小化
? 血清的影響最小化
? 可以輕松地實現在體外從單核細胞得到樹突 狀細胞
? 誘導效率高
? 細胞誘導效果確切
PromoCell DC DXF 產品和同類產品相比較
PromoCell的DC細胞生成培養基和市面上其他的培養基想比，在 同等培養時間和細胞供體情況下，其培養效率為競爭對手的5倍。
Fig.:Comparison of moDC yield.Freshly isolated peripheral blood monocytes were cultured for 10 days in the respective media. Each of the media was supplemented with the PromoCell cytokine Pack moDC DXF.
使用PromoCell DC生成介質為樹突狀細胞的生成DXF有什么優勢？
DC DXF（C-28052）是一種無血清，化學定義的不含動物來源的誘導培養基。它提供了一個完整的培養系統 （即用型，包括所有細胞因子），在體外即可誘導新鮮分離的外周血單核細胞又可誘導凍存細胞，在DC細胞的誘導上顯示了高效性，重復性 好的卓越性能。
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