腫瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法

腫瘤細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求不如正常細(xì)胞嚴(yán)格，一般常用RPMI、DMEM、McCoy-5A等培養(yǎng)基，血清濃度不高，10%即可，建議最好在原代培養(yǎng)時(shí)能加入生長(zhǎng)因子或原患者血清（1%-2%）以利細(xì)胞生長(zhǎng)。培養(yǎng)方法很多，主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細(xì)胞法等。

1.組織塊法

將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1-2mm3小塊，接種于事先涂有鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶（或皿）中，37℃、5%CO2或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。

2.酶消化法

在上述的碎組織塊中加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml膠原酶，在37℃水浴中消化30min或更長(zhǎng)一些，去除消化液，用洗液洗3次，培養(yǎng)基洗1次后，用完全培養(yǎng)基懸浮，并用吸管吹打分散制成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。以（5-10）x108個(gè)/L細(xì)胞濃度，在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中，在37℃、5%CO2下分瓶（或皿）中培養(yǎng)。

3.鉭網(wǎng)法

在一張面積約為1cm2的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊（1-2mm3大小），用鑷子輕壓，使其粘于網(wǎng)上，再把但網(wǎng)放入培養(yǎng)皿中，使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸，于37℃、5%CO2下培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次，5天后可見有上皮細(xì)胞從網(wǎng)上移出，并能在相當(dāng)于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細(xì)胞。

4.脫落細(xì)胞法

將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結(jié)締組織，洗液洗2次后，用刀片將腫瘤組織切成細(xì)薄片，在切割的同時(shí)有許多上皮細(xì)胞脫落下來，脫落細(xì)胞經(jīng)洗滌后，加入完全培養(yǎng)基，便可獲得較純的上層細(xì)胞，于培養(yǎng)瓶（或皿）中，37℃、5%CO2下培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次，7-10天上皮細(xì)胞逐漸長(zhǎng)成單層。

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