EdU-告別細胞增殖的煩擾

細胞增殖是評價細胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標。

EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見，能夠在DNA復制時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在合成的DNA分子中，基于Apollo?熒光染料與EdU的特異性反應即可直接并準確地檢測出DNA復制活性，廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA損傷修復、病毒繁殖等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及各種藥物的細胞增殖及活力篩選實驗。

超越BrdU

傳統的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法需要DNA變性，抗原修復，抗原抗體過夜孵育，操作步驟復雜繁瑣。

并且由于BrdU抗體分子較大，嵌入DNA分子中的BrdU無法直接與BrdU抗體結合，必須先進行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但變性的程度可能導致錯誤結果。如果變性不充分，會導致BrdU難以暴露，無法檢測，而且變性過程從邊緣向中間滲透，會導致細胞核DNA的變性不均勻，邊緣模糊不清。如果變性過分，則會導致DNA斷裂，甚至降解，導致核染不均一。另外，不同抗體試劑公司的抗體質量不一致，造成難以確保實驗重復性，且容易產生假陽性結果。

圖1 BrdU需要DNA變性，但變性過分或沒有變性都可能容易導致BrdU結果假陽性

與BrdU方法相比，EdU檢測方法無需DNA變性，無需抗原修復，無需抗原抗體反應，更簡單、更靈敏、更快速、更準確，是細胞增殖檢測的最佳選擇。

圖2 BrdU與EdU檢測原理示意圖 表1 BrdU與EdU檢測優缺點比較

更準確--無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細胞核邊緣清晰完整；

更簡單--無需抗原抗體反應，基于小分子化學反應的檢測方法，簡單高效，反應僅需要幾分鐘；

更靈敏--無需抗體，檢測染料僅為BrdU抗體的1/500，更容易擴散，即使單個增殖細胞也能準確檢測；

更快速--無需過夜，省卻了抗原抗體反應的復雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期僅需2.5小時；

更兼容--對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征。

圖3 BrdU需要DNA變性后才能與抗體結合，導致BrdU、Hoechst染色彌散，邊緣模糊不清；而EdU邊緣清晰完整，檢測更靈敏、更準確

多種染料配套

EdU細胞增殖方法簡單，方便，無需DNA變性，能夠與各種抗體或熒光蛋白同時標記，以檢測細胞其他性狀特征。為了與其他熒光共同使用，銳博生物提供多種染料供選擇，覆蓋常用檢測通道，方便您輕松選擇適合的染料，最大限度地擴展第三方染色的適用范圍，最大限度地滿足您的檢測儀器要求，完全解決您的實驗難題。

圖4 三種染料激發光譜和發射光譜（虛線：激發光譜；實線：發射光譜）

圖5 三種染料分別檢測EdU孵育2h的Hela細胞（40X）

EdU細胞增殖檢測方法不需要劇烈的DNA變性操作，只需溫和的細胞固定化和透化處理，能夠較好地保護細胞形態、DNA整體結構及細胞內抗原識別位點，更適合結合其他染料或蛋白標記（如P65抗體）等進行多重標記，從而在細胞水平獲取更多的直觀多維特征信息，更適合深入開展細胞功能方面的研究。

圖6 結合P65抗體和EdU，分析藥物對細胞增殖及NF-KB信號通路的影響

該方法無需DNA變性，無需抗原修復，無需抗原抗體反應，簡單、靈敏、快速、準確，適合各種細胞系的細胞增殖檢測，尤其適用于各種細胞系的高通量篩選實驗，如在藥物篩選中檢測加藥后細胞增殖變化。

圖7 EdU增殖檢測方法對各種細胞系均適用，簡單、靈敏、快速、準確

EdU方法無需DNA變性，完全適用于各種顯微成像技術，在10X，20X，40X都能得到很好的成像效果。

圖8 A549細胞系孵育2h后的細胞增殖檢測（10X, 20X, 40X）

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