糖化型淀粉酶活力的測定
一、實驗目的
1、 學習糖化型淀粉酶(或液體曲)酶活力的測定方法。
2、 了解糖化型淀粉酶活力大小對工藝生產的指導意義。
二、實驗原理
糖化型淀粉酶可催化淀粉水解生成葡萄糖。本實驗在一定條件下用一定量的糖化型淀粉酶作用于淀粉，然后用碘量法測定所生成的葡萄糖的含量來計算淀粉酶的活力。
碘量法定糖原理：
淀粉經糖化酶水解生成葡萄糖，葡萄搪具有還原性，其羰基易被弱氧化劑次碘酸鈉所氧化：
體系中加入過量的碘，氧化反應完成后用硫代替硫酸鈉滴定過量的碘，即可推算出酶的活力。
I2＋2Na2S2O3 = Na2S4O6 ＋ 2NaI
三、儀器、原料和試劑
儀器
吸管(25mL，5mL，2mL，10mL)、定碘瓶(500mL)、 堿式滴定管、燒杯、恒溫水浴鍋、分析天平。
原料：
待測酶液
試劑
1. 2％可溶性淀粉溶液：準確稱取2克可溶性淀粉(預先于100~105℃烘干至恒重約2小時)，加少量蒸餾水調勻。傾入80毫升左右的沸蒸餾水中，繼續煮沸至透明，冷卻后用水定容至100毫升。
2. 0.05 mol/L碘液：稱取25克碘化鉀溶于少量水中，加入12.7克碘，溶解后定容至1000毫升。
3. pH4.5的1mol/L醋酸緩沖液：稱取8.204克無水醋酸鈉，先在少量水中溶解，定容至1000毫升。取分析純冰醋酸5.78毫升定容至1000毫升。以上兩種溶液按醋酸和醋酸鈉的體積比為25：22混合即為所要求之緩沖液。
4. 0.1 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取分析純氫氧化鈉4克溶解并定容至1000毫升。
5. 1 mol/L硫酸 ：吸取分析純濃硫酸(比重1.84)55.5毫升，緩緩如入944.5毫升水定容至1000毫升。
6. 0.01 mol/L硫代硫酸鈉：稱取26克硫代硫酸鈉(Na2S2O3·5H2O)和0.4克碳酸鈉，用煮沸冷卻的蒸餾水溶解并定容至1000毫升，配制后放置三天再標定。
四、操作步驟
取2％可溶性淀粉溶液25毫升加pH4.5醋酸緩沖液5毫升混勻，在40℃恒溫水浴中預熱5－10分鐘加入待測酶液2毫升(空白以蒸餾水代替酶液)準確計時1小時。取出加入4滴20％NaOH終止酶反應，冷卻至室溫。取上述反應液5毫升于定容瓶中，先加入0.05mol/L碘液10毫升，再加0.1 mol/LNaOH 10毫升，搖勻暗處靜置15分鐘。加入 2N硫酸 2毫升。用 0.05硫代硫酸鈉滴定至無色。其與空白消耗硫代硫酸鈉毫升數的差值應在4~6之間，否則要適當調整酶液的稀釋倍數。
五、計算：
A—空白所消耗的Na2S2O3的毫升數；
B—樣品所消耗的Na2S2O3的毫升數；
90.05—1毫升1N的Na2S2O3相當的葡萄糖毫克數；
V1—酶液的體積(2毫升)；
V2—反應液總體積(32.20豪升)；
V3—吸取反應液樣品體積(5毫升)；
N—酶液稀釋倍數；
N—Na2S2O3的當量濃度(0.01mol/L)。
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