種子蛋白質(zhì)系統(tǒng)分析:種子蛋白質(zhì)含量測定（凱氏定氮法）
一、目的：
谷物是人類特別是發(fā)展中國家人民的主要蛋白質(zhì)來源，谷物中蛋白質(zhì)含量是衡量其品質(zhì)和營養(yǎng)價值的最重要的指標(biāo)。培育高蛋白谷物品種，是廣大育種工作者的奮斗目標(biāo)。
對現(xiàn)有谷物進(jìn)行評價、利用，對大批原始材料（種質(zhì)資源）及育成品系進(jìn)行品質(zhì)篩選，都需要測定種子蛋白質(zhì)含量。測定種子蛋白質(zhì)含量的方法很多，一般可分為間接方法和直接方法兩大類。凱氏定氮法是間接方法中的一種，國際谷物化學(xué)協(xié)會（ICC）、美國分析化學(xué)協(xié)會 ( AOAC）、美國谷物化學(xué)協(xié)會（AACC）等及不少國家都把凱氏定氮法定為標(biāo)準(zhǔn)法。通過本實驗學(xué)習(xí)凱氏定氮法的原理，掌握樣品的處理和自動凱氏定氮儀的操作。
二、原理
根據(jù)蛋白質(zhì)的含氮量比較恒定，平均約為16% ，通過測定樣品的含氮量進(jìn)而推算蛋白質(zhì)的含量。種子中的氮化物可分為蛋白氮和非蛋白氮。用三氯乙酸溶出種子粉或脫脂種子粉中的非蛋白氮化物（氨基酸、酞胺和無機(jī)氮），沉淀樣品中的蛋白質(zhì)并使二者分離。在催化劑參與下，用濃硫酸消煮分解樣品，使蛋白氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮，并與硫酸結(jié)合生成硫酸按。加堿蒸餾，使氨釋放出來并吸收于一定量的硼酸中，再用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定，求出樣品中氮含量，乘以16％的倒數(shù)6.25 即可換算成蛋白質(zhì)含量。
三、儀器、試劑和材料
1．儀器
( 1 )分析天平
( 2 )消化護(hù)
( 3 )消化管4 支
( 4 )具塞三角瓶100ml x2
( 5 )康氏振蕩機(jī)1 臺
( 6 )漏斗2 個
( 7 )吸管10ml X 1, 5mlX 1
( 8 )自動凱氏定氮儀（VS-KT-P 型）
2．試荊
( 1 ) 5％三氯乙酸
( 2）濃硫酸
( 3）混合催化劑硫酸銅：硫酸鉀＝1 : 4 ( W / W )
( 4 ) 40％氫氧化鈉
( 5 ) 4％硼酸
( 6 ) =0.05mol / L 標(biāo)準(zhǔn)硫酸
( 7）混合指示劑 50ml0.1％甲烯藍(lán)乙醇溶液與200ml0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中。
四、操作步驟
( 1）用分析天平稱取谷物全粉0.1000g 二份，分別加入2 只l00ml 具塞三角瓶中。
( 2）在三角瓶中加5％三氯乙酸20ml，置康氏振蕩機(jī)上振蕩提取（非蛋白氮化物）lh ，過濾，棄濾液。用5％三氯乙酸洗滌濾紙上的沉淀，最后將漏斗里的沉淀連同濾紙一起放入 1、2 號消化管內(nèi)，在3、4 號消化管內(nèi)各加1 張相同濾紙，作為空白。
( 3）在1-4 號管內(nèi)各加適量催化劑及5ml 濃硫酸。置消化爐上，200℃ 消化0 .5h，然后升溫至400℃ 再消化0.5h 。消化液呈清亮、藍(lán)綠色。
( 4）待消化液冷卻后，用自動定氮儀進(jìn)行蒸餾、滴定。儀器可自動打印出結(jié)果報告，也可根據(jù)儀器給出的標(biāo)準(zhǔn)硫酸消耗體積進(jìn)行手工計算。
五、結(jié)果處理
六、注意事項消化樣品時要注意安全，防止?fàn)C傷或損失樣品。
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