SDS-PAGE電泳測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
實驗原理
SDS-PAGE電泳法，即十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳法，。
1．在蛋白質(zhì)混合樣品中各蛋白質(zhì)組分的遷移率主要取決于分子大小和形狀以及所帶電荷多少。
2．在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中，加入一定量的十二烷基硫酸鈉（SDS），SDS是一種陰離子表面活性劑，加入到電泳系統(tǒng)中能使蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵打開，并結合到蛋白質(zhì)分子上（在一定條件下，大多數(shù)蛋白質(zhì)與SDS的結合比為1.4gSDS/1g蛋白質(zhì)），使各種蛋白質(zhì)—SDS復合物都帶上相同密度的負電荷，其數(shù)量遠遠超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，從而掩蓋了不同種類蛋白質(zhì)間原有的電荷差別。此時，蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量大小，而其它因素對電泳遷移率的影響幾乎可以忽略不計。
3. 當?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在15000～200000之間時，電泳遷移率與分子量的對數(shù)值呈直線關系，符合下列方程：
1gMr =K― bm R
式中：Mr為蛋白質(zhì)的分子量；K為常數(shù)；b為斜率；mR為相對遷移率。在條件一定時，b和K均為常數(shù)。
若將已知分子量的標準蛋白質(zhì)的遷移率對分子量的對數(shù)作圖，可獲得一條標準曲線。未知蛋白質(zhì)在相同條件下進行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量。
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