薄層層析的特點(diǎn)與發(fā)展歷程
一、薄層色譜技術(shù)的特點(diǎn)
薄層色譜技術(shù)具有其他色譜技術(shù)共同的特征,即利用樣品中各組成成分的不同物理特性把它們分離開來。這些物理特性包括分子 大小、形狀、所帶電荷、揮發(fā)性、溶解性及吸附性等。
1.薄層色譜系統(tǒng)的組成部分
固定相:可以是一種固體、凝膠或固定化的液體,或起支撐作用的基質(zhì)。
色譜板:把固定相薄薄涂布在玻璃或塑料板上。
流動(dòng)相:又稱展開劑,起溶劑作用的液體,用于協(xié)助樣品在固定相表面以不同速度進(jìn)行遷移。
運(yùn)送系統(tǒng):用來促使流動(dòng)相通過色譜床。薄層色譜的運(yùn)送過程是借助毛細(xì)管作用、壓力或者離心力等設(shè)備。
檢測系統(tǒng):用于檢測所分離的物質(zhì)。
2.薄層色譜技術(shù)的特點(diǎn)
①色譜系統(tǒng)所用器材簡單,價(jià)格低廉,操作技術(shù)易學(xué),容易在一般實(shí)驗(yàn)室推廣。
②不受樣品種類的限制,適用范圍較廣。不僅可用于復(fù)雜成分的分離,還可用于未知成分的分離和檢測。并且檢測可用的手段選擇性多,較為方便。
③具有多路柱效應(yīng),可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣品的分離,且靈敏度高、檢測速度快。
④樣品前處理比較簡單,精度要求不高,還可直接用樣品的粗提物點(diǎn)樣。實(shí)驗(yàn)時(shí)溶劑用量少,更換容易,實(shí)驗(yàn)成本較低。
⑤在獲得典型色譜圖后,既可以直接掃描進(jìn)行測定,也可通過彩色攝影制成彩色圖譜 或利用計(jì)算機(jī)圖像處理系統(tǒng)進(jìn)行處理后作為規(guī)范文件永久保存。
二、薄層色譜技術(shù)發(fā)展演變歷程
薄層色譜法是20世紀(jì)50年代從經(jīng)典柱色譜法及紙色譜法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種色譜技術(shù)。進(jìn)入20世紀(jì)60年代后,人們對(duì)薄層色譜法在使用器材的不斷改進(jìn)、操作技術(shù)水平的不斷提高等方面進(jìn)行了大量的工作,如薄層板的制備和點(diǎn)樣裝置的從手工逐步過渡到自動(dòng),從人工控制到機(jī)械化自動(dòng)控制,使薄層色譜法的操作精度日益提高,因而也就為該項(xiàng)技術(shù)在中藥及其制劑中各類化學(xué)物質(zhì)的定性與定量分析中的廣泛應(yīng)用提供了技術(shù)支持條件。特別是在近20年來,隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的不斷滲透,人們對(duì)薄層色譜法在縮短分離時(shí)間、提高分離效率、提高檢測靈敏度、保證定量精度及擴(kuò)大應(yīng)用范圍等方面不斷進(jìn)行研究,使該方法不僅在儀器設(shè)備 上不斷完善,而且在技術(shù)水平上取得了突破性進(jìn)展。主要有以下幾個(gè)方面的突出表現(xiàn)。
第一方面,薄層色譜與其他分離分析技術(shù)聯(lián)用,更加拓寬了薄層色譜技術(shù)的適用范圍。比如,與其他色譜法聯(lián)用從而產(chǎn)生了薄層色譜與高效液相色譜法聯(lián)用、薄層色譜與氣相色譜 聯(lián)用、HPLC-GC/MS-TLC聯(lián)用、高速反流色譜與薄層色譜聯(lián)用等技術(shù)。這些聯(lián)用技術(shù)有效地解決了一些組成復(fù)雜而含量又極微的化學(xué)成分分離的技術(shù)難題。
第二方面,薄層色譜與其他分析檢測儀的聯(lián)用,增加了分析檢測的準(zhǔn)確性和精密度。這樣不僅可以強(qiáng)化其定性的功能,而且還可以對(duì)樣品中被分離的一種或多種成分進(jìn)行在線聯(lián)用定量分析,這與以往將斑點(diǎn)從薄層上刮下后再與各種光譜聯(lián)用相比,其準(zhǔn)確性和精密度都有顯著提高。比如,薄層色譜--紫外可見光譜掃描儀(如Camag II型薄層掃描儀/HP300計(jì)算機(jī)系統(tǒng)),在光源允許的范圍內(nèi),可選擇多達(dá)9種波長,依次自動(dòng)掃描,從而獲得三維光譜的薄層色譜圖,人們可以利用不同顏色繪制的三維圖,直觀地看到各組分在不同波長的吸光強(qiáng)度及其變化情況,選定波長時(shí)同時(shí)掃描測定樣品中各成分的含量。此外,還有薄層色譜法與光譜法聯(lián)用而產(chǎn)生的薄層色譜與原子吸收光譜聯(lián)用、薄層色譜與紅外光譜聯(lián)用、薄層色譜與拉曼光譜聯(lián)用、薄層色譜與光聲光譜聯(lián)用、薄層色譜與質(zhì)譜聯(lián)用、薄層色譜與核磁共振聯(lián)用和薄層色譜與數(shù)字自動(dòng)化放射自顯影聯(lián)用等技術(shù)。通過這些技術(shù)的聯(lián)用,人們可以獲取豐富的被測化合物的結(jié)構(gòu)信息,也使薄層色譜的定性功能得到了進(jìn)一步的加強(qiáng)。類似這樣的聯(lián)用技術(shù)還包括與電化學(xué)法聯(lián)用而出現(xiàn)的薄層色譜法與方波陽極伏安法聯(lián)用、薄層色譜法與脈沖極譜法聯(lián)用、薄層色譜與庫侖滴定法聯(lián)用等技術(shù),它們在解決復(fù)雜的中藥化學(xué)成分檢測的問題方面均獲得了滿意的結(jié)果。
第三方面,薄層色譜照相技術(shù)是近幾年發(fā)展起來的一項(xiàng)專業(yè)攝影技術(shù),主要是對(duì)經(jīng)過色譜的薄層板,在燈光(日光)或一定波長的紫外光下,將可見光或熒光斑點(diǎn)完整地以照片形式記錄下來,從而得到一張永久性的薄層色譜圖,它記錄了薄層色譜的所有信息。近年來利用數(shù)碼技術(shù)直接將圖像信息輸入計(jì)算機(jī)內(nèi)進(jìn)行儲(chǔ)存和打印,不僅提高了薄層圖像的質(zhì)量,而且還保證了薄層色譜數(shù)據(jù)資料的規(guī)范性。
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