豬腦脂質的提取及其分離鑒定
[原理]
動物腦組織富含多種脂質，有甘油磷脂、鞘氨醇磷脂、糖脂、膽固醇等。本實驗采用Blign和Dyer方法，提取豬腦脂質，快速有效。首先使用一相醇溶液系統（即氯仿-甲醇-水），將各種脂質一并提取出來，提取物再用氯仿和水稀釋，以形成二相系統，水溶性雜質易分配進入甲醇-水相，而脂質進入氯仿相把脂質分離。
薄層層析（Thin--Layer-Chromatography縮寫TLC）是將作為固定相的支持劑涂于支持板上面進行的一種層析技術。此法較相應支持劑材料做成的柱層析、紙層析等有更多的優越性。最突出的特點是操作簡便和層析速度快。缺點是對生物大分子分離效果欠佳。近年來，由于薄層板的不斷改進，實施薄層層析的操作 儀器 化，已將一般的薄層層析發展成為高效薄層層析（HPTLC），可在幾分鐘內將含有多至十余個組分的樣品分離開。各種規格的薄層預制版及專門 儀器 已趨向商品化。
制作薄層層析用的硅膠一般有兩類。一類是不加添加劑的稱硅膠H；另一類是添加了黏合劑（如石膏）稱硅膠G。有的為便于鑒定，還加入了特殊的熒光劑，常以字母F表示。不同類型的硅膠各有不同的用途。本實驗是用硅膠H為支持劑，用薄層層析技術分離鑒定腦組織所含的脂質。
[方法和步驟]
1、脂質的提取
稱取新鮮豬腦1.5g，用剪刀剪碎，置于研缽內磨成漿后，倒入勻漿管內，冰浴中勻漿2min。向勻漿內加入7.5mL抽提液Ⅰ，繼續勻漿2min。然后將勻漿液于2500 r/min離心10min。吸取上清液貯存于分液漏斗中，沉淀再加入9.5mL抽提液Ⅱ，攪拌成懸濁液后再勻漿2min，隨之離心10min。合并兩次上清液，加入氯仿和水各2.5mL，分液漏斗內間歇搖振2min，然后靜置30min左右，提取液逐漸分成兩相（注意觀察分相過程）。上相為甲醇-水相，下相為含脂質混合物的氯仿相，從漏斗分流出氯仿相，置冰箱內備用。
2、脂質的分離鑒定（薄層層析法TLC）
（1）硅膠H薄層的制備
將經95%乙醇擦凈過的3mm×35mm×100mm層析玻璃置于水平臺上，然后稱取精制硅膠H 3.0g置于25mL:燒杯內，加入0.1%碳酸氫鈉約8mL，調成具有一定愁度和流動性的膠漿。用10mL量筒量取漿液3mL，迅速小心流鋪在層析板上（注意板面厚度均勻，切勿使漿液溢出板外），鋪畢后繼續水平靜置30min～1h，使硅膠充分沉固，薄層表面凝成膜狀。然后將層析板移入烘箱內水平位置，40℃干燥至硅膠薄層發白。
（2）薄層活化
升高烘箱溫度，使薄層充分干燥，此過程稱為活化。為防止薄層表面起泡，應首先于80℃左右烘20min左右，然后升溫至120℃再烘2h，活化畢小心取出置于干燥器內冷卻至室溫。
（3）點樣
將活化的硅膠薄板從干燥器內取出放妥后，立即在距底邊2～3cm處中央，用內徑0.5mm點樣毛細管吸取脂質混合液，分三次在同一點上點入薄層。點樣直徑不超過2～3mm，每點一次待近干后再點下一次（小心勿損壞薄層膠面）。
（4）平衡和展開
將潔凈層析缸一端墊起，使其傾斜成15 0 左右，然后沿低端的缸內壁加入一定量的展開 試劑 。將點好樣的薄板小心安放在缸內，近點樣的一頭擱在缸底高的無展開劑侵入的一端，另一端靠在缸內壁或玻架上）。將薄板位置調整穩妥后，加蓋封閉平衡約2h。
平衡結束后，仍保持層析缸封閉狀態，將缸底一端的展開劑傾斜流向另一端，層析板硅膠浸入展開劑中，展開開始。待展開劑上行至層析板上端1~1.5cm處，展開停止，開蓋取出薄板晾干。
（5）顯色
將展開晾干的薄板置于碘蒸氣缸內熏蒸，30min后即漸見黃色斑點顯出，數小時后，斑點更明顯。展層結果通常出現5～6個分離斑點。描出實驗圖譜。
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